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食用菌培养基的制备

2015-09-14 09:54:58
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    根据各种食用菌生长时对营养物质的要求,用人工方法配制而成的营养基质,供菌丝生长发膏。把这种营养物质叫培养基。它如同农作物需要土壤、肥料,动物需要饲料一样。

 (一)培养基种类 目前,人们采用的培养基相当多,种类各不相同。不论哪种培养基都有共同特点:一般都含有水分、碳源、氮源、无机盐以及生长因素等。水分是食用菌的组成成分,食用菌在生理活动中,需要在有水的情况下进行。 碳源是构成细胞物质的主要元素,也是食用菌生长发膏所需能量来源。碳源的主要原料是糖类、淀粉、纤维素物质。代表物质是葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麸皮、米糠、锯木、棉籽壳等。 氮源是食用菌细胞质和细胞核中蛋白质和核酸的主要元素,蛋白质和核酸是生命的基本物质。一切生命活动都离不开这些物质。氮源主要有氨基酸、蛋白胨、尿素、硫酸银、含有氮素的物质有玉米、棉籽壳。 培养基中的无机盐虽用量不多;但不可缺少。它主要是酶类的组成成分,调节各种生命代谢活动。如磷酸二氢钾、硫酸镁。 生长因素需要量很少,是培养基中的特殊营养物质,它是维持食用菌正常生长所不可缺少的生长因素。如马铃薯、 麸皮、米糠等都含有丰富的生长因素,维生素也属此类。 根据营养物质的来源,黄年来等同志进行了细致的分类,把所有培养基分成三大类: 1.天然培养基:它是利用天然的有机物配制而成的培养基。这种培养基来源广,成本低,很适合实胨生产。特别具备营养丰富、制备方便、经济实用等优点。但他学成分不能定量,每批成分也不稳定,因此不宜用来进行精确的科学实验。 常用的天然培养基,有马铃薯培养基、麦芽汁培养基、杏汁培养基、苹果培养基、麦芽培养基、堆肥培养基等。 2.半合成培养基:在天然培养基中,适当增加无机盐 类,或在合成培养基中添加少量别的有机物,成为半合成培养基,介于天然培养基和合成培养基之间。主要目的是促进菌丝生长发膏。 3.合成培养基:用化学成分已知的有机物或无机物配制而成的培养基。由于各种化学成分已经清楚,容易控制, 所以适合某些定性和定量研究。

(二)食用菌母种分高用培养基的制作 食用菌的母种就是从孢子分离培养或组织分高培养获得的菌丝体。一般常在琼脂培养基上培养。 1.马铃薯——蔗糖——球脂培养基(PDA): 马铃薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 琼脂 20克 PH值 5.5~6.0 制法:先将新鲜无病害的马铃薯洗净,去皮后切成小薄片,称200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后过滤,其滤汁为马铃薯煮汁。然后加琼脂和蔗糖煮溶,后补足水分至1000毫升,装管(瓶)灭菌备用。 一般食用菌母种的分离和培养都适合此培养基。 2.葡萄糖——麦芽膏——酵母膏培养基(GMY): 麦芽膏 10克 葡萄糖 11克 酵母膏 4克 琼脂 18克 水 加至1000毫升 PH值 自然 麦芽膏可用麦芽汁代替,10克麦芽膏可用18克勃力克司浓度的麦芽汁600毫升代替。 3.黄豆饼粉培养基: 黄豆饼粉 40克 葡萄糖或蔗糖 20克 琼脂 18克 水 1000毫升 PH值 自然 制法:称黄豆饼粉40克用清水调成糊状,再加水1000 毫升,煮沸后30分钟,过滤,用热水补足1000毫升,加入琼脂蔗糖溶化即可分装试管。 4.玉米粉培养基: 玉米粉 30克 蛋白胨 20克 蔗糖 20克 琼脂 18克 水 1000毫升 pH值 自然 5.木汁麦麸(米糠)培养基: 麦麸(米糠) 100克 硫酸铁 1克 蔗糖 20克 琼脂 20克 水 1000毫升 pH值 5~6 制法:将木屑用双层纱布包严煮沸20分钟取出木屑包,补足1000毫升水,加入琼脂、糖等拌匀溶化即可。 6.麦粒培养基: 小麦粒 200克 糖 5克 碳酸钙 15克 水 500毫升 PH值 自然 制法:取小麦200克洗净,置锅中加水500毫升,煮沸20分钟,加入其他成分,煮5分钟,用纱布过滤,水汁分 装至试管的 1/3长度为好。 7.杏汁培养基(适合朴菇子实体的发生): 干杏 25克 琼脂 15—30克 水 1000毫升 PH值 自然 8.胡萝卜培养基(代替马铃薯): 胡萝卜 100克 糖 18~25克 琼脂 20克 水 1000毫升 9.苹果培养基(适于草菇生长): 苹果(压碎) 100克 蛋白胨 2克 蔗糖 20克 琼脂 20克 水 1000毫升 10.高粱培养基(特别适于平菇类生长): 高粱粉 30克 琼脂 10克 水 1000毫升 11.粪汁培养基(供筛选蘑菇菌种): 马厩肥 150克 玉米粉(取汤) 30克 琼脂 20~30克 水 1000毫升 12.酸性培养基(供分离菌种及培养猴头菌): 马铃薯(去皮) 200~250克 糖 20克 琼脂 25克 柠檬酸 1%~5%(灭菌后加人) 水 1000毫升

(三)原种和栽培种培养料的制备 原种是由母种繁殖而来,进而制成栽培种,用于播种、生产。 1.粪草培养基(适于制作蘑菇菌种): 粪草(粪:草=6:4、堆积发酵15~20天) 90斤 米糠或麸皮 8斤 碳酸钙 1斤 糖 1斤 水 适量 2.麦粒培养基(适于制作蘑菇、凤尾菇、毛木耳菌种): 浸湿蒸透的麦粒 88% 木屑 10% 石膏 2% 水 50%一60% 3.木屑米糠培养基(适宜各种木生食用菌的制作): 阔叶树木屑 70%~80% 米糠或麸皮 20%~28% 碳酸钙 1% 蔗糖 1% 石膏 1% 水 调至适量 4.棉皮培养基(平菇、凤尾菇户) 棉籽壳 99% 石膏粉 1% 5.玉米芯培养基: 玉米芯 99% 石膏粉 1% 6.稻草培养基: 稻草 94% 麸皮 5% 石膏 1% 蔗糖 1% 7.棉皮木屑培养基: 棉皮 78% 木屑 20% 蔗糖 1% 石膏 1% 水料比为 1.2~1.3:1 8.羊屎培养基(蘑菇): 在侵漉屎中,加入1%~3%碳酸钙或1%石灰。 9.玉米秆粉培养基: 玉米秆 78% 麸皮 21% 石膏 1%

(四)棉塞、牛皮纸盖、卫生纸气塞的制作 根据所栽培的品种选择适宜培养基,然后即可将培养基分装。 分装是指琼脂培养基分装和原种、栽培种分装。 装好培养基的试管、三角瓶或菌种瓶,应立即塞上大小适合的棉塞,以防杂菌侵入培养基。所用的棉花、以白色长绒的不脱脂棉花为理想。也可用人造塑料海绵代替棉花作瓶塞,效果很好。棉塞表面要光滑,松紧度要适当。温差变化比较大的地方,棉塞要塞紧一些。 制作棉花塞时,先把棉花铺开,撕成5~6厘米宽的长条,用手握紧,粗度适当,棉塞要稍紧密,塞入后也不能起皱成沟。否则容易掉落,杂菌也容易跑进培养基。 塞好棉塞的空试管,可用烘干箱加热到15℃左右,干热灭菌1小时后备用。 菌种瓶棉塞和试管相同,只是粗细之别。 另外,缺少棉花的地方,可用双层牛皮纸中间加一层棉花作瓶塞。 还可用耐高温塑料纸作瓶塞。目前有些地方的菌种瓶是塑料纸中间打一小孔用胶布封严,接种时只要按操作把菌种放入小孔的办法,也可采用。 母种试管口用卫生纸作透气塞。装好培养基后,试管口擦干净,把卫生纸(普通或高级均可),卷成同试管口一样粗细的筒,剪成5厘米长的小段,每段塞入试管内3厘米,外留2厘米,再扎成捆,用牛皮纸包严、灭菌。接种后还可用塑料胶布将试管口与卫生纸联封。培养按常规办法。 原种瓶或栽培种瓶用卫生纸作通气寨时,先按一定配方装满瓶后,洗净瓶内外壁,把卫生纸剪成5厘米宽条幅,每条卷成同瓶口一样大小的简,塞入瓶内3厘米,外留2厘米;灭菌后接种、培养。 塑料袋制种时,若用"两头"接种,装料后扎紧两头,然后将卫生纸剪成3厘米长、1厘米粗的小卷,用牛皮纸包 严同塑料袋一起装锅灭菌,再放入接种箱消毒,操作时将袋口解开,接入菌种,再将卫生纸小卷夹在袋口中间,用线绳或皮筋扎紧即成。接种完毕后,按常规放入培养室管理。 用塑料袋生料栽培食用菌时,两头可用卫生纸作通气塞。 通过我们多次试验,卫生纸作透气塞,不会像棉花那样湿塞,避免了因湿塞而引起杂菌污染;卫生纸通气性能好、吸水性强、杂菌少,蒸发到瓶口的水珠不易积于料面;以往我们用棉花、塑料环,成本高,工序多,用卫生纸可大大降低成本。

(五)培养基的灭菌 按上述培养基装好后就要立即进行灭菌;将其中的杂菌杀死,然后才能接入我们所需要的纯菌种,进行培养。 不论是母种分离时用的斜面培养基,还是原种、栽培种瓶培养基或聚丙烯塑料袋培养基,一般都采用热力灭菌法。 高压蒸汽灭菌法:若是斜面试管培养基。应先用牛皮纸扎成捆,标明棉塞为上端部分,然后竖直放入高压锅内,进行灭菌。在1.5公斤/平方厘米压力下维持30分钟,即可达到灭菌目的。开锅取试管时,趁热放成斜面。经试验若无杂菌,可用。若有杂菌时,重新灭菌。 灭菌材料如是原种和栽培种,应在15公斤/平方厘米压力保持60~90分钟。这样才能达到灭菌目的。达到所规 定的时间后,应停火并逐渐排去蒸汽。待压力表的指针回复零位时,再把消毒锅的螺栓旋开,打开盖子,取出瓶子。停火排汽时必须注意,排汽阀不能一下子放大,只有一点一点开,让压力表慢慢地回复到原位,然后再揭锅盖。如果排汽过猛,锅内压力急速下降,则会造成棉塞脱落和玻璃容器破损。 常压蒸汽灭菌法:如没有具备高压锅,可用土蒸锅或蒸笼进行。在常压的条件下,以 100℃的温度持续6-8小时,以杀死培养料中的各种杂菌。也可常压间歇灭菌3次。可先蒸1小时,然后隔24小时又如法蒸1次,连续3次,就可达到灭菌目的。 培养基的灭菌效果要经常检验,是否灭菌彻底:一般情况下,灭菌后的培养基最好应放在要培养的温度下,空白培养1周,可检查灭菌效果。如果在这一段时间内培养基没发生任何变化,说明灭菌效果良好,可以使用。

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